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貓衣原體核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)

對貓眼鼻分泌物中貓衣原體DNA進行檢測。

  • 產(chǎn)品品牌 REAGEN
  • 產(chǎn)品貨號 RPD990204
  • 產(chǎn)品規(guī)格 50/100T
  • 產(chǎn)品適用 對貓眼鼻分泌物中貓衣原體DNA進行檢測。
  • 產(chǎn)地來源 深圳

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱:貓衣原體核酸檢測試劑盒(熒光PCR)

【包裝規(guī)格】

50人份/

【預(yù)期用途】

貓眼鼻分泌物中貓衣原體DNA進行檢測

【檢驗原理】

本試劑盒采用聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)結(jié)合Taqman技術(shù),對貓衣原體的特異性DNA核酸片段進行熒光PCR檢測。

【主要成分】

 

組分成分

50人份/

主要成分

規(guī)格

數(shù)量

 

PCR反應(yīng)液

 

1014μL /

 

1

引物、探針、脫氧核糖核苷三磷酸(dNTP)、緩沖體系

酶混合液

26μL /

1

Taq酶、UDG

陽性對照

200μL /

1

含目的片段的質(zhì)粒

陰性對照

500μL /

1

生理鹽水

 【儲存條件及有效期】

試劑置于-30~-15避光保存,有效期為12個月。本產(chǎn)品反復(fù)凍融應(yīng)不超過5。

【適用儀器】

熒光定量PCR儀:ABI 7500熒光PCR.;ABI Quantstudio5 ;Gentier 96R;SLAN-96P全自動醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)

【樣本要求】

眼鼻分泌物

【檢驗方法】

1. 樣本處理

請根據(jù)具體樣本類型選用適當(dāng)?shù)暮怂崽崛≡噭ㄗ詡洌?/span> 并按照該試劑的說明書提取 DNA。提純后的核酸應(yīng)盡快用于檢測,或-20℃保存。

2. 試劑配置(在準備區(qū)進行,與擴增區(qū)分開,冰上操作

注:試劑使用前要完全解凍,使用前渦旋混勻,10000 rpm離心5 s,確保試劑完全離心至管底,否則會出現(xiàn)裝量差異的現(xiàn)象。若有N個待檢測樣本,則需配置N+2擴增反應(yīng)(待檢樣本數(shù)N+1個陽性質(zhì)控品+1個陰性質(zhì)控品,按下表要求進行擴增反應(yīng)液的配制,配制完成后充分震蕩混勻,10000 rpm離心

5 s。按每管20μL分裝至0.2 ml PCR管中,并做好標記擴增反應(yīng)液需現(xiàn)配現(xiàn)用。


N人份(μL)

PCR反應(yīng)液

N+2×19.5

酶混合液

N+2×0.5

總量

N+2×20

3. 加樣在樣品處理區(qū)進行,冰上操作

按陰性質(zhì)控品、待測樣品、陽性質(zhì)控品的加樣順序,分別取5μL,加入至已分裝擴增反應(yīng)液的PCR管中,反應(yīng)總體系為25μL。蓋緊管蓋,短暫離心后置于熒光定量PCR儀中,并記錄樣本擺放順序。

4. 擴增反應(yīng)(在擴增區(qū)進行

選擇FAM通道檢測貓衣原體核酸。按以下擴增程序表設(shè)置PCR擴增參數(shù)。

步驟

溫度

時間

循環(huán)數(shù)

1

預(yù)變性

95

3min

1

2

變性

95

10sec

45cycle

3

退火延伸及熒光檢測

55

30 sec

報告熒光:FAM;淬滅熒光:NONE。

5. 質(zhì)量控制


FAM通道Ct

陰性對照

UNDET

陽性對照

35

以上要求需在同一次實驗中同時滿足,否則,本次實驗無效,需重新進行。

6.結(jié)果判讀

反應(yīng)結(jié)束自動保存結(jié)果,根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)Baseline Start 值、End 值以及Threshold 值(可以根據(jù)實際情況自行調(diào)整,Start 值可以在3~15、End 值可設(shè)在5~20,調(diào)整陰性對照的擴增曲線平直或低于閾值線),點擊Analysis 自動獲得分析結(jié)果,在Report 界面觀看結(jié)果。

試驗結(jié)果判斷


通道

陽性判斷條件

1

FAM

Ct40,且擴增曲線呈典型S,報告陽性

2

FAM

Ct>40,報告為陰性。

檢驗結(jié)果的解釋

1. 實驗室環(huán)境污染,試劑污染,樣品交叉污染會出現(xiàn)假陽性結(jié)果,如陰性對照檢測為陽性,則需做進

一步實驗來確認是哪類污染。如為試劑污染,需開封新的試劑盒再次進行實驗;如為樣品交叉污染,應(yīng)重復(fù)實驗;如為實驗室環(huán)境污染,需對實驗室進行徹底清潔或更換實驗室再進行實驗。

2. 試劑運輸、保存或配制不當(dāng)會引起試劑檢測性能下降,出現(xiàn)假陰性結(jié)果。如陽性對照檢測為陰性,

應(yīng)開封新的試劑盒再進行實驗。

檢測方法的局限性

1. 該試劑盒僅為定性產(chǎn)品,不做定量測定。

2. 當(dāng)樣本病毒含量低于最低檢出限時,可能會出現(xiàn)假陰性。陰性結(jié)果僅說明提取的核酸濃度低于該試劑盒的檢測極限,但不能完全排除病毒感染的可能

【產(chǎn)品性能指標】

1.準確性企業(yè)陽性參考品檢測結(jié)果全部為陽性,陽性率為15/15。

2.最低檢測限:該試劑盒最低檢測限為500copies/mL。

注意事項

1.請嚴格按照操作步驟操作,試劑配制和加樣等步驟請嚴格按照說明書要求在冰上操作。

2試劑配制建議在試劑配制區(qū)進行,樣品處理要求生物安全柜內(nèi)操作。臨床實驗室應(yīng)嚴格按照《醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》等有關(guān)分子生物學(xué)實驗室、臨床基因擴增實驗室的管理規(guī)范執(zhí)行

3.反應(yīng)液中的成分對光敏感,應(yīng)避光保存。反復(fù)凍融可能降低試劑盒靈敏度,請按檢測頻次將反應(yīng)液以適當(dāng)體積分管保存。

4.反應(yīng)結(jié)束后,擴增管請置于密封袋內(nèi)丟棄,當(dāng)日清理,切忌開蓋。

5.不同批號試劑請勿混合使用,請在有效期內(nèi)使用試劑盒。

6. 本品僅用于體外診斷。


企業(yè)愿景

    公司將一如既往的視誠信為最重要的文化精神;在經(jīng)營決策和管理的全過程中信守“以產(chǎn)品質(zhì)量、優(yōu)質(zhì)服務(wù)”為原則和“為人類健康服務(wù)”為宗旨的理念;融前沿科技、全球資源與優(yōu)質(zhì)人才為資本,以開拓創(chuàng)新、銳意進取、精益求精之精神,科學(xué)管理之導(dǎo)向,凝聚員工、客商之合力,同舟共濟,為實現(xiàn)人類的食品安全和生物醫(yī)藥業(yè)的高速發(fā)展不懈奮斗!

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